Seminarios de Actualización del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA) 2019
Director: Dr. Daniel LOMBARDO.
Coordinadoras: Mg. Teplitz, Gabriela y Dra. Fumuso, Fernanda
Descripción: El objetivo es establecer un ámbito de intercambio de ideas para favorecer la aplicación de las investigaciones en curso a la resolución de problemas suscitados en la práctica. Las temáticas abordadas serán:
Destinatarios: Veterinarios, Biólogos y Agrónomos.
Horario: 13:30 a 15:30 hs.
Fecha: 8 de noviembre de 2019.
Disertante: Dr. Alejandro Maruri
Cátedra de Histología y Embriología, INITRA (FVET-UBA)
Tema: Detección del antígeno de proliferación celular ki-67 como predictor del desarrollo in vitro de embriones bovinos
Carga horaria: 2 horas
Resumen: El desarrollo embrionario es consecuencia de procesos de proliferación y diferenciación celular que se reflejan en los cambios morfológicos y funcionales de los sucesivos estadios. Las metodologías tradicionales de evaluación de la cinética del desarrollo se basan en la observación embrionaria bajo lupa estereoscópica a tiempos definidos. Alteraciones en la proliferación celular pueden bloquear o reducir la velocidad de desarrollo y observarse una asincronía entre los diferentes estadios. La detección del antígeno de proliferación celular Ki-67 se utiliza ampliamente en histopatología tumoral por su valor pronóstico. La marcación del antígeno Ki-67 en embriones bovinos de estadios tempranos podría utilizarse como un parámetro de calidad embrionaria. El objetivo de este trabajo fue detectar la expresión del antígeno Ki-67 en embriones bovinos de día 2 y 7 de desarrollo, producidos en dos sistemas de cultivo con diferente rendimiento, con el fin de determinar su posible utilidad como predictor temprano del desarrollo in vitro. Para la producción de embriones, se obtuvieron complejos cumulus ovocitos a partir de ovarios de faena, se maduraron in vitro durante 22 h e incubaron con espermatozoides durante 5 h. Los presuntos embriones se cultivaron las primeras 48 h en dos sistemas diferentes: en cocultivo con células luteales bovinas (CLB-1) y en medio SOF sin células (control). Luego, en ambos casos se cultivaron en medio SOF hasta el día 8. El desarrollo embrionario se evaluó por observación bajo lupa estereoscópica los días 2 y 8. Se realizó inmunofluorescencia indirecta en embriones segmentados de día 2 y en blastocistos de día 7 de ambos grupos experimentales. Se determinó el índice de proliferación celular (IPC: células Ki-67+/ blastómeras totales) en cada uno de los embriones evaluados. Se utilizó la tinción con Hoechst 33342 para determinar el número total de blastómeras por embrión (NTC). Los embriones se observaron con un microscopio de fluorescencia. Los datos se analizaron estadísticamente considerando diferencias significativas con p < 0,05. No existieron diferencias significativas en el porcentaje de segmentación a día 2 (control: 84%, n = 141 vs. cocultivo: 83%, n = 133), sin embargo, el IPC fue significativamente mayor en el cocultivo (control: 0,13±0,023, n = 54 vs. cocultivo: 0,48±0,044, n = 65). Asimismo, el NTC no difirió entre los grupos (control: 8,3±0,58 vs. cocultivo: 8,2±0,55). El IPC en blastocistos de día 7 no mostró diferencias entre los grupos (control: 0,88±0,023, n = 17 vs. cocultivo 0,9±0,014, n = 15), así como tampoco el NTC (control: 76,7±5,33 vs. cocultivo: 83,5±6,77) a pesar de existir diferencias significativas en el rendimiento de blastocistos entre los grupos (control: 29,8%, n = 141 vs. cocultivo: 50,4%, n = 133). Se concluye que la detección del antígeno Ki-67 en embriones bovinos de estadios tempranos (día 2) podría utilizarse como predictor temprano de la competencia para el desarrollo in vitro. Por otro lado, la determinación del IPC en blastocistos no tendría el mismo valor, al menos en los sistemas de cultivo in vitro que fueron utilizados.
No se requiere inscripción.
No arancelado
